Instituto de Biotecnología, UNAM

Secuenciación Automatizada de DNA
Dr Paul Gaytan y MC Jorge Arturo Yañez
Unidad de Síntesis y Secuenciación
Instituto de Biotecnología, UNAM
Av. Universidad #2001, Col. Chamilpa, Cuernavaca, Morelos, MEXICO. C.P. 62210
Tel. (+52) 777 329 1712, (+52) 55 5622 1712; Fax. (+52) 777 317 2388

Reglamento del Servicio de Secuenciación de ADN
PREPARACION DE LA MUESTRA:
La mezcla DNA/Oligo se debe entregar en un volumen final de 16 ul, en un tubo eppendorf de tapa plana de 0.2 ml para PCR, sin anotaciones en la tapa.
Dicha mezcla debe contener 10 pmolas del oligo elegido para secuenciar [por ejemplo, 1 ul de solución de oligo 10 uM (pmol/ul)] y de 300 a 500 ug de plásmido si su tamaño es de 3 a 5 Kb.
Si el plásmido es del doble de tamaño, entonces se deben entregar de 600 a 1000 ug.
En caso de productos de PCR, estos se deben purificar por gel y entregar de 100 a 120 ng, mezclados con 10 pmolas de oligo, en el mismo volumen final de 16 ul.
La calidad del proceso de secuenciación depende principalmente de la calidad y cantidad del DNA entregado.
Antes de enviar las muestras, se recomienda analizarlas por gel y cuantificarlas por nanodrop. La cuantificación por gel es subjetiva y NO debe usarse para estimar la concentración de DNA.

La USSDNA puede adicionar los oligonucleótidos:
m13/pUC -40 FORWARD 5> GTT TTC CCA GTC ACG TTG TA >3
m13/pUC REVERSE 5> TTG TGA GCG GAT AAC AAT TTC >3
T7 PRIMER 5> TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG >3
SK PRIMER 5> CGC TCT AGA ACT AGT GGA TC >3
T3 PRIMER 5> CGC ATT TAA CCC TCA CTA AAG >3
KS PRIMER 5> TCG AGG TCG ACG GTA TCG >3


La mecánica de trabajo será la siguiente:
  1. Entregar las muestras en tubos de 200uL para PCR sin anotaciones en la tapa
  2. Las muestras a secuenciar, junto con sus respectivas solicitudes por duplicado serán recibidas estrictamente en el área de secuenciación de 10 a 13 hrs, durante los cinco días hábiles de la semana. Al momento de la recepción, Jorge les asignará un número confidencial, que les servirá para bajar sus resultados desde www.ibt.unam.mx --> Uso Interno --> Solicitudes deServicio --> Secuenciacion de DNA ; a partir del tercer día hábil posterior a la fecha de solicitud.
  3. Las condiciones en cuanto a pureza y cantidad de las muestras siguen siendo las mismas que se especifican en la solicitud de secuencia ( "bajar" solicitud en PDF)
  4. La única forma de obtener los resultados será con su número asignado a través de la página anteriormente mencionada.

Cualquier duda, aclaración ó sugerencia debe ser dirigida al Dr. Paúl Gaytán

Precio de Secuenciación (por muestra)
Usuarios IBT$8.00 USDls
Usuarios Externos$10.00USDls


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